Le cours

2. Les méthodes d’étude de la cellule

2.3. Le microscope électronique

•    va nous permettre à l'intérieur de la cellule d'étudier des objets extrêmement petits, jusqu'à l'échelle d'une macromolécule. Le microscope électronique
•  va nécessiter une préparation spéciale des cellules qui est différente de celle de la microscopie optique.

• Il donne des photos en noir et blanc.

1.      Le microscope électronique à transmission (MET) :

-  Utilise un rayonnement électronique.

-  Possède un pouvoir séparateur 40 000 fois supérieur à celui du microscope optique et deux millions de fois plus que l’œil humain, et qui est théoriquement de 2nm.

- Les microscopes électroniques nécessitent la déshydratation de l’échantillon et donc la mort des cellules et du fait du faible pouvoir pénétrant des électrons les échantillons doivent être sous forme de coupes ultra fines (< 0,1um) après inclusion dans une résine.

- L’objet fixé est bombardé d’électrons, ces derniers permettent d’obtenir une image agrandie, qui se formera sur un écran fluorescent.

 * Technique de coloration négative 

Certaines structures échappent à la microscopie électronique, la coloration négative permet de les mettre en évidence. L’échantillon biologique est placé sur un film et on attend que les sels de métaux lourds se déposent autour de l’échantillon, qui est coincé dans une pellicule de colorant imperméable aux électrons. Il apparait en clair sur un fond sombre.

2.      Le microscope électronique à balayage (MEB): Consiste à balayer un échantillon par un faisceau d’électrons, la surface est recouverte d’un film de platine obtenu par ombrage métallique.

• L’ombrage métallique de l’échantillon à étudier consiste à vaporiser sous vide une très fine couche de métal lourd, qui recouvre l’échantillon d’une fine pellicule. L’ombrage métallique permet d’accentuer les reliefs.

•  Le microscope électronique à balayage donne des images tridimensionnelles de l’échantillon, et permet d’étudier les surfaces cellulaires, les organites et même à l’intérieur des membranes.

Figure1 : Le microscope optique MO et le microscope électronique ME.